ʻO ka Dithiothreitol (DTT) kahi mea hoʻohaʻahaʻa maʻamau i hoʻohana ʻia, ʻike ʻia hoʻi ʻo ka mea hoʻohui ʻōmaʻomaʻo hou.ʻO ia ka pūʻulu ʻano mole liʻiliʻi me ʻelua pūʻulu mercaptan (-SH).Ma muli o kāna mau waiwai hōʻemi a paʻa, hoʻohana nui ʻia ʻo DTT i nā hoʻokolohua biochemistry a me ka molecular biology.
ʻO ka hana nui o DTT ka hōʻemi ʻana i nā paʻa disulfide i nā protein a me nā biomolecules ʻē aʻe.ʻO ka paʻa disulfide kahi mea koʻikoʻi o ka hoʻopili ʻana o ka protein a me ka paʻa, akā ma lalo o kekahi mau kūlana hoʻokolohua, e like me ka hoʻemi ʻana i ka SDS-PAGE analysis, protein recombination a me ka hoʻopili ʻana, pono e hoʻemi i ka paʻa disulfide i ʻelua mau pūʻulu thiol e wehe i ka hoʻolālā spatial o ka protein.Hiki i ka DTT ke hana me nā paʻa disulfide e hōʻemi iā lākou i nā pūʻulu mercaptan, no laila e wehe ai i ke ʻano spatial o ka protein a me ka maʻalahi o ka nānā ʻana a me ka manipulate.
Hiki ke hoʻohana ʻia ʻo DTT no ka pale ʻana i ka hana enzyme a me ke kūpaʻa.I kekahi mau hopena i hoʻopaʻa ʻia e ka enzyme, hiki ke hoʻemi ʻia ka hana o ka enzyme e ka mea ʻokiʻoki.Hiki i ka DTT ke hana me ka oxidants e hoemi ia lakou i mea ino ole, pela e pale ai i ka hana a me ka paa o ka enzyme.
Ke hoʻohālikelikeʻia me nā mea hoʻohaʻahaʻa maʻamau e like me β-mercaptoethanol (β-ME), ua manaʻoʻiaʻo DTT he mea palekana aʻoi aku ka paʻa.ʻAʻole paʻa wale ia i ka hoʻonā wai, akā mālama pū nō hoʻi i kāna mau waiwai hōʻemi ma lalo o ke kiʻekiʻe kiʻekiʻe a me nā kūlana acid-base.
He maʻalahi ka hoʻohana ʻana o DTT.Ma keʻano laulā, ua hoʻoheheʻeʻia ka DTT i kahi pale kūpono a laila hoʻohuiʻia i ka pūnaewele hoʻokolohua.Pono e hoʻoholo i ka manaʻo maikaʻi loa o DTT e like me ka hoʻokolohua kikoʻī, a hoʻohana maʻamau i ka laulā o 0.1-1mM.Hiki i nā haʻahaʻa haʻahaʻa ke hōʻemi i nā hopena ʻino i ka ulu ʻana o ka cell a hiki ke hōʻemi i ka cytotoxicity ma muli o ka overexpression o nā protein target.Hiki ke hoʻonui ʻia ka nui o ka hoʻonui ʻana o ka cell metabolic, e pili ana i ka ulu ʻana o ka cell a me ka hōʻike ʻana.
ʻO ke ala e hoʻoholo ai i ka noʻonoʻo maikaʻi loa e hiki ke loiloi i ka pae hōʻike o ka protein target ma o ka hoʻokō ʻana i nā hoʻokolohua induction IPTG ma nā ʻano ʻokoʻa.Hiki ke hana ʻia nā hoʻāʻo moʻomeheu liʻiliʻi me ka hoʻohana ʻana i ke ʻano o nā ʻano IPTG (e laʻa me 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, a me nā mea ʻē aʻe) a hiki ke loiloi ʻia ka hopena hōʻike ma nā ʻano ʻokoʻa ma ka ʻike ʻana i ke kiʻekiʻe o ka hōʻike o ka protein target (e laʻa. blot or fluorescence detection).Wahi a nā hopena hoʻokolohua, ua koho ʻia ka manaʻo me ka hopena hōʻike maikaʻi loa ma ke ʻano he ʻano kūpono.
Eia kekahi, hiki iā ʻoe ke kuhikuhi i ka palapala pili a i ʻole ka ʻike o nā laboratories ʻē aʻe e hoʻomaopopo i ka laulā IPTG maʻamau i hoʻohana ʻia ma lalo o nā kūlana hoʻokolohua like, a laila koho a hoʻoponopono e like me nā pono hoʻokolohua.
Pono e hoʻomaopopo he ʻokoʻa paha ka manaʻo maikaʻi loa ma muli o nā ʻōnaehana hōʻike like ʻole, nā protein i hoʻopaʻa ʻia, a me nā kūlana hoʻokolohua, no laila ʻoi aku ka maikaʻi o ka loiloi ʻana i kēlā me kēia hihia.
I ka hōʻuluʻulu ʻana, ʻo DTT kahi mea hoʻohaʻahaʻa maʻamau i hiki ke hoʻohana ʻia e hōʻemi i nā paʻa disulfide i loko o nā protein a me nā biomolecule ʻē aʻe a no ka pale ʻana i ka hana enzyme a me ke kūpaʻa.Ua hoʻohana nui ʻia i ka biochemistry a me nā hoʻokolohua molecular biology.
Ka manawa hoʻouna: Sep-28-2023