ʻO Dithiothreitol (DTT) kahi mea hoʻemi i hoʻohana nui ʻia, i ʻike ʻia hoʻi ʻo ia ka mea hoʻohui ʻōmaʻomaʻo hou. He hui organik molekala liʻiliʻi ia me ʻelua mau hui mercaptan (-SH). Ma muli o kona mau waiwai hoʻemi a me ke kūpaʻa, hoʻohana nui ʻia ʻo DTT i nā hoʻokolohua biochemistry a me nā biology molekala.
ʻO ke kuleana nui o DTT ka hoʻemi ʻana i nā pilina disulfide i loko o nā protein a me nā biomolecules ʻē aʻe. He ʻāpana koʻikoʻi ka pilina disulfide o ka pelu ʻana a me ke kūpaʻa o ka protein, akā ma lalo o kekahi mau kūlana hoʻokolohua, e like me ka loiloi SDS-PAGE hiki ke hoʻemi ʻia, ka hui hou ʻana o ka protein a me ka pelu ʻana, pono e hoʻemi i ka pilina disulfide i ʻelua mau hui thiol e wehe i ke ʻano spatial o ka protein. Hiki i ka DTT ke hana me nā pilina disulfide e hoʻemi iā lākou i nā hui mercaptan, no laila e wehe ana i ke ʻano spatial o ka protein a e maʻalahi ai ke kālailai a me ka hoʻoponopono.
Hiki ke hoʻohana ʻia ʻo DTT e pale i ka hana a me ke kūpaʻa o ka enzyme. I kekahi mau hopena i hoʻoulu ʻia e ka enzyme, hiki ke hoʻemi ʻia ka hana o ka enzyme e ka oxidant. Hiki i ka DTT ke hana me nā oxidants e hoʻemi iā lākou i nā mea ʻino ʻole, a laila e pale ana i ka hana a me ke kūpaʻa o ka enzyme.
Ke hoʻohālikelike ʻia me nā mea hoʻemi kuʻuna e like me β-mercaptoethanol (β-ME), ua manaʻo ʻia ʻo DTT he mea hoʻemi palekana a paʻa hoʻi. ʻAʻole ia he paʻa wale nō i loko o ka wai hoʻoheheʻe, akā mālama pū i kona mau waiwai hoʻemi ma lalo o ke kiʻekiʻe o ka mahana a me nā kūlana waikawa-kumu.
He maʻalahi ka hoʻohana ʻana o DTT. Ma keʻano laulā, hoʻoheheʻe ʻia ka DTT i loko o kahi buffer kūpono a laila hoʻohui ʻia i ka ʻōnaehana hoʻokolohua. Pono e hoʻoholo ʻia ka nui kūpono o DTT e like me ka hoʻokolohua kikoʻī, a hoʻohana nui ʻia ma ka pae o 0.1-1mM. Hiki i nā nui haʻahaʻa ke hōʻemi i nā hopena maikaʻi ʻole ma ka ulu ʻana o nā cell a hiki ke hōʻemi i ka cytotoxicity ma muli o ka overexpression o nā protein target. Hiki i nā nui kiʻekiʻe ke hoʻoulu i ka ukana metabolic cell nui, e hoʻopilikia ana i ka ulu ʻana o nā cell a me ka pono o ka hōʻike ʻana.
ʻO ke ala e hoʻoholo ai i ka noʻonoʻo kūpono hiki ke loiloi i ka pae hōʻike o ka protein target ma ka hana ʻana i nā hoʻokolohua hoʻokomo IPTG ma nā ʻano like ʻole. Hiki ke hana ʻia nā hoʻokolohua moʻomeheu liʻiliʻi me ka hoʻohana ʻana i kahi laulā o nā ʻano IPTG (e laʻa me 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, a pēlā aku) a hiki ke loiloi ʻia ka hopena hōʻike ma nā ʻano like ʻole ma ka ʻike ʻana i ka pae hōʻike o ka protein target (e laʻa me Western blot a i ʻole ka ʻike ʻana i ka fluorescence). Wahi a nā hopena hoʻokolohua, ua koho ʻia ka noʻonoʻo me ka hopena hōʻike maikaʻi loa ʻo ia ka noʻonoʻo kūpono.
Eia kekahi, hiki iā ʻoe ke kuhikuhi i nā palapala pili a i ʻole ka ʻike o nā keʻena hoʻokolohua ʻē aʻe e hoʻomaopopo i ka pae hoʻonui IPTG i hoʻohana pinepine ʻia ma lalo o nā kūlana hoʻokolohua like, a laila e hoʻomaikaʻi a hoʻoponopono e like me nā pono hoʻokolohua.
He mea nui e hoʻomaopopo he ʻokoʻa paha ka nui kūpono ma muli o nā ʻōnaehana hōʻike like ʻole, nā protein i hoʻopaʻa ʻia, a me nā kūlana hoʻokolohua, no laila ʻoi aku ka maikaʻi o ka hoʻomaikaʻi ʻana ma kēlā me kēia hihia.
I ka hōʻuluʻulu manaʻo, ʻo DTT kahi mea hoʻemi i hoʻohana pinepine ʻia e hiki ke hoʻohana ʻia e hōʻemi i nā pilina disulfide i loko o nā protein a me nā biomolecules ʻē aʻe a e pale i ka hana enzyme a me ke kūpaʻa. Ua hoʻohana nui ʻia ia i nā hoʻokolohua biochemistry a me nā biology molecular.
Ka manawa hoʻouna: Sep-28-2023