Pehea e hoʻoholo ai i ka noʻonoʻo kūpono?
No ka mea hoʻoulu IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka nui, ʻoi aku ka maikaʻi. ʻO ka nui kūpono e pili ana i nā kūlana hoʻokolohua kikoʻī a me ka hopena hoʻoulu i makemake ʻia.
Ma keʻano laulā, hoʻohana ʻia ka nui o IPTG ma ka pae o 0.1-1 mM. Hiki i nā nui haʻahaʻa ke hōʻemi i nā hopena maikaʻi ʻole ma ka ulu ʻana o ke kelepona a hiki ke hōʻemi i ka cytotoxicity ma muli o ka hoʻonui nui ʻana o nā protein i manaʻo ʻia. Hiki i nā nui kiʻekiʻe ke hoʻoulu i ka ukana metabolic cell nui, e hoʻopilikia ana i ka ulu ʻana o ke kelepona a me ka pono o ka hōʻike ʻana.
ʻO ke ala e hoʻoholo ai i ka noʻonoʻo kūpono hiki ke loiloi i ka pae hōʻike o ka protein target ma ka hana ʻana i nā hoʻokolohua hoʻokomo IPTG ma nā ʻano like ʻole. Hiki ke hana ʻia nā hoʻokolohua moʻomeheu liʻiliʻi me ka hoʻohana ʻana i kahi laulā o nā ʻano IPTG (e laʻa me 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, a pēlā aku) a hiki ke loiloi ʻia ka hopena hōʻike ma nā ʻano like ʻole ma ka ʻike ʻana i ka pae hōʻike o ka protein target (e laʻa me Western blot a i ʻole ka ʻike ʻana i ka fluorescence). Wahi a nā hopena hoʻokolohua, ua koho ʻia ka noʻonoʻo me ka hopena hōʻike maikaʻi loa ʻo ia ka noʻonoʻo kūpono.
Eia kekahi, hiki iā ʻoe ke kuhikuhi i nā palapala pili a i ʻole ka ʻike o nā keʻena hoʻokolohua ʻē aʻe e hoʻomaopopo i ka pae hoʻonui IPTG i hoʻohana pinepine ʻia ma lalo o nā kūlana hoʻokolohua like, a laila e hoʻomaikaʻi a hoʻoponopono e like me nā pono hoʻokolohua.
He mea nui e hoʻomaopopo he ʻokoʻa paha ka nui kūpono ma muli o nā ʻōnaehana hōʻike like ʻole, nā protein i hoʻopaʻa ʻia, a me nā kūlana hoʻokolohua, no laila ʻoi aku ka maikaʻi o ka hoʻomaikaʻi ʻana ma kēlā me kēia hihia.
Ka manawa hoʻouna: Sep-28-2023